La clorofila es un pigmento verde que se encuentra en las plantas superiores y en todos los demás organismos fotosintéticos. La clorofila A y la clorofila B son solubles en etanol, éter y acetona y otros solventes, insolubles en agua y éter de petróleo, por lo tanto, pueden usar solventes polares como acetona, metanol, etanol, acetato de etilo, etc. para extraer clorofila.
Proceso de extracción de clorofila:
La extracción de clorofila se prepara en una habitación semioscura a 25 grados C. Los pasos de extracción son los siguientes:
(1) Tome 1000 gramos de hojas verdes frescas y tritúrelas en un Wechsler.
(2) Ponga los 1000 gramos triturados de hojas verdes en acetona con una pequeña cantidad de carbonato de calcio (temperatura 20 grados) para la extracción, hasta que los fragmentos de hojas sean incoloros después de filtrar y limpiar.
(3) Coloque el extracto de acetona filtrado en un embudo que contenga 1 litro de éter de petróleo y 100 ml de acetona, y luego gírelo suavemente mientras agrega agua destilada hasta que se estratifique. La mayor parte de la acetona y las impurezas solubles en agua en la capa de agua se descartan, dejando solo la solución de éter de petróleo.
(4) Después de que la solución de éter de petróleo se purifica nuevamente con agua destilada, se limpia más de 5 veces con 200 ml de solución de metanol al 80 por ciento que contiene éter de petróleo y 0,01 g de ácido oxálico, y finalmente se obtiene una suspensión de color amarillo verdoso. .
(5) Secar la suspensión con sulfato de sodio anhidro e infiltrarla en una columna de sacarosa en polvo de 3 cm de espesor. Luego limpia los pigmentos precipitados para eliminar los carotenoides y que solo contengan clorofila natural.
(6) La columna de sacarosa que contiene clorofila natural se divide en dos capas, la capa verde tiene una capa de clorofila B de 4-10 mm, la otra capa azul tiene una capa de clorofila A de 2-6 mm.
(7) La parte ubicada en el medio de la capa azul (aproximadamente la mitad de la capa azul) se pone en éter, la suspensión se filtra y se extrae, se limpia con agua destilada, se seca con sulfato de sodio y se filtra con utensilios para obtener clorofila UNA.
(8) Retire la parte media de la capa verde en (6) y póngala rápidamente en el éter para filtrar y lavar para hacer una solución de éter de clorofila B.
¿Cómo separar durante la extracción?
La cromatografía es un método importante para la separación, purificación e identificación de compuestos orgánicos, especialmente en microanálisis, es ampliamente utilizado. Los pigmentos en frutas y verduras incluyen principalmente caroteno soluble en grasa, luteína, clorofila y antocianina soluble en agua. En los experimentos de extracción, podemos hacer uso del principio de filtración de antocianinas solubles en agua de miscibilidad similar, que a su vez puede hacer uso de cromatografía en capa fina, cromatografía en columna, cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para la separación de betacaroteno, luteína y la clorofila, debilitada debido a la polaridad de los tres tipos de pigmento a su vez, se puede elegir apropiadamente como solvente orgánico único o diferente proporción de solvente mixto como agente de expansión y agente de elución. Se determinaron las condiciones óptimas de separación.
